Aplikace HPLC analýzy v rotační odparce

Vysokoúčinná kapalinová chromatografie (HPLC) se také nazývá vysokotlaká kapalinová chromatografie, vysokorychlostní kapalinová chromatografie, kapalinová chromatografie s vysokým rozlišením a moderní sloupcová chromatografie. Jedná se o účinnou a rychlou analytickou separační technologii rychle vyvinutou v 70. letech 20. století a je důležitým prostředkem moderního testování separace.

Vysokoúčinná kapalinová chromatografie (HPLC) používá kapalinu jako mobilní fázi a využívá vysokotlaký infuzní systém k čerpání mobilní fáze, jako je jediné rozpouštědlo s různými polaritami nebo směsné rozpouštědlo a roztok pufru s různými poměry, do chromatografické kolony se stacionární fází. Poté, co jsou složky v koloně odděleny, vstupují do detektoru pro detekci, aby byla provedena analýza vzorku.

Separační mechanismus vysokoúčinné kapalinové chromatografie je stejný jako u konvenční kolonové chromatografie, ale náplň je jemnější a musí být tlačena vysokotlakým čerpadlem, které má vysokou účinnost kolony a vysokou rychlost analýzy. Na rozdíl od plynové chromatografie se mobilní fáze v kapalinové chromatografii podílí také na procesu separace složek a její složení, podíl a hodnota pH lze flexibilně upravovat různými způsoby separace. V praxi se retenční hodnota a selektivita vzorků v chromatografické koloně upravuje změnou složení mobilní fáze tak, aby bylo možné separovat různé vzorky.

 

Složky HPLC analýzy

 

Sloupec: Kolona je hlavní komponentou systému HPLC, která se používá k separaci sloučenin ve vzorku. Mezi běžné separační kolony patří kolona s reverzní fází, iontoměničová kolona, ​​gelová filtrační kolona atd. a jejich výběr závisí na vlastnostech separované sloučeniny a účelu analýzy.

Mobilní fáze: Mobilní fáze je kombinace rozpouštědel používaných v HPLC k průchodu vzorku separační kolonou. Mobilní fáze se obvykle skládá ze směsi rozpouštědel, což může být jediné rozpouštědlo nebo směs více rozpouštědel v určitém poměru. Pro separační efekt je velmi důležitý výběr vhodného průtoku.

Čerpadlo: Čerpadlo se používá k zajištění mobilní fáze a její protlačování přes separační kolonu při určitém tlaku. Mezi běžná čerpadla patří čerpadlo s konstantním tlakem a gradientní čerpadlo. Gradientní čerpadlo může realizovat lineární nebo nelineární změnu složení mobilní fáze, aby se dosáhlo lepšího separačního účinku.

Injektor: Injektor se používá k zavedení vzorku, který má být analyzován, do systému HPLC. Vzorkovačem může být ručně ovládaná stříkačka nebo automatický vzorkovač. Obvykle mají vlastnosti přesného objemu a dobré opakovatelnosti, aby bylo zajištěno přesné vstřikování vzorku.

Sloupová pec: Kolonová pec se používá k řízení teploty separační kolony. Řízením teploty lze měnit distribuční koeficient a separační rychlost vzorku v koloně, čímž se optimalizuje separační efekt.

Detektor: Detektor se používá k detekci separované sloučeniny a generování elektrického signálu souvisejícího s její koncentrací. Mezi běžné detektory patří ultrafialový-viditelný absorpční detektor, fluorescenční detektor a elektrochemický detektor. Výběr detektoru závisí na vlastnostech analyzované sloučeniny a požadavcích na citlivost detekce.

Systém sběru dat: Systém sběru dat se používá k příjmu, záznamu a analýze signálů na výstupu z detektoru. Dokáže převést detekovaný signál na parametry, jako je plocha píku a retenční čas, a poskytnout analýzu a interpretaci výsledků.

 

Po odstranění rozpouštědla pomocírotační výparníkzískaný vzorek je obvykle koncentrovaný nebo pevný. Pokud chcete dále analyzovat nebo detekovat sloučeniny ve vzorku, můžete je analyzovat pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC).

Obecné kroky pro analýzu vzorků po rotačním odpařování pomocí HPLC

 

1. Rozpouštění vzorku: vzorek rozpusťte po rotačním odpařování ve vhodném rozpouštědle. Při výběru rozpouštědel je třeba vzít v úvahu rozpustnost látky, která má být analyzována, a požadavky na podmínky analýzy HPLC.

2. Příprava standardního roztoku: Je-li zapotřebí kvantitativní analýza, lze připravit standardní roztok testované sloučeniny pro následnou korekci a výpočet výsledků analýzy.

3. Proveďte HPLC analýzu: nastříkněte vzorek do systému HPLC a nastavte vhodnou separační kolonu, mobilní fázi a detektor. Podle účelu analýzy zvolte vhodné metody a parametry, jako je průtok, teplota a gradientový program.

4. Sběr dat a analýza: chromatogram vzorku se shromáždí systémem HPLC a cílová sloučenina se kvantifikuje nebo identifikuje podle plochy píku, retenčního času nebo jiných souvisejících parametrů. Pro kvantitativní analýzu lze použít metodu standardní křivky a metodu interního standardu.

5. Interpretace výsledků: Podle výsledků analýzy byly sloučeniny ve vzorku hodnoceny kvalitativně a kvantitativně. Podle potřeby můžete generovat zprávy nebo zaznamenávat výsledky analýzy.

 

Použití rotovapu v HPLC analýze má dva praktické významy

 

• Koncentrace vzorku: V některých případech může být koncentrace analyzovaného vzorku příliš nízká, takže lze ke koncentraci vzorku použít chemickou rotační odparku, aby se zvýšila citlivost detekce analytu v HPLC.
• Odstraňování rozpouštědla: U některých vzorků mohou rozpouštědla interferovat s analýzou HPLC, proto je nutné odstranit nebo nahradit rozpouštědla ve vzorcích rozpouštědly vhodnými pro HPLC. Laboratorní rotační odparka může pomoci odstranit rozpouštědlo a transformovat vzorek do formy vhodné pro HPLC analýzu.

 

HPLC analýza arotační výparníkjsou dvě běžně používané techniky v chemické analýze a mají určité rozdíly a souvislosti v principu a aplikaci.

 

Rozdíl

 

Zásada: HPLC je založena na principu kapalinové chromatografie a separace a kvantitativní analýza jsou realizovány interakcí mezi stacionární fází (kolona) a mobilní fází (rozpouštědlo). Výparník využívá principu zahřívání a rotace k rychlému odpaření kapalného vzorku a odstranění rozpouštědla, aby došlo ke koncentraci vzorku nebo ke změně prostředí rozpouštědla ve vzorku.

Oblast použití: HPLC je široce používána v chemii, farmacii, životním prostředí a dalších oblastech a může být použita pro separaci, identifikaci a kvantitativní analýzu sloučenin v komplexních směsích; Rotační odpařování se používá hlavně v procesu koncentrace vzorku, odstraňování rozpouštědla a přípravě vzorku a běžně se používá v organické syntéze, extrakci přírodních produktů, přípravě vzorků a dalších oblastech.

Rychlost analýzy: Analýza HPLC obvykle trvá dlouho, než se separují a detekují vzorky, což může trvat několik minut až několik hodin; Vakuová rotační odparka dokáže odpařit kapalné vzorky rychle v krátkém čase, obvykle jen několik minut.

 

Připojit

 

Vzorová léčba: Rotační odpařovací zařízení se často používá ke koncentraci vzorků nebo odstranění rozpouštědel během přípravy vzorků, aby byly vzorky vhodné pro další analytické metody, jako je HPLC. Účinek a přesnost HPLC analýzy lze zlepšit zkoncentrováním vzorku a odstraněním rozpouštědla na rotační odparce.

Výběr rozpouštědla: Při analýze HPLC je výběr rozpouštědla velmi důležitý pro separační účinek; Therotační výparníkmůže pomoci odstranit rozpouštědlo ze vzorku a transformovat vzorek do formy vhodné pro HPLC analýzu. Proto může rotační odparka poskytnout uspokojivé rozpouštědlové podmínky pro analýzu HPLC.

 

Provádíme ruční zvedací rotovap a elektrický zvedací rotovap, kontaktujte nássales@achievechem.compřizpůsobit svůj vlastní rotační výparník.