HPLC sloupcová chromatografie
2. Chromatografický sloupec (typ rotace)
3. Chromatografický sloupec (manuál)
*** Ceník pro celek výše, zeptejte se nás, abychom získali
Popis
Technické parametry
HPLC sloupcová chromatografie, známá také jako vysoce výkonná kapalinová chromatografie (vysoce výkonná kapalinová chromatografie), je kapalinová chromatografie sloupce s vysokou účinností separace a je také důležitou větví chromatografie.
Odděluje komponenty ve vzorku podle rozdílu adsorpční síly a rozdělovacího koeficientu mezi pevnou fází a mobilní fází. Uprostřed vysokotlakého infuzního systému, mobilní fáze (obvykle jediné rozpouštědlo nebo směs rozpouštědel s různými polaritami) je čerpána do sloupce obsahujícího stacionární fázi. Když každá složka ve vzorku prochází sloupcem chromatogramu, kvůli různé velikosti a síle interakce se stacionární fází (jako je adsorpce, distribuce, vyloučení, afinita), doba pobytu ve stacionární fázi je také odlišná, aby se dosáhlo oddělení každé složky. Oddělené komponenty pak vstoupí do detektoru pro detekci, čímž získají kvalitativní a kvantitativní informace každé složky.
Parametr
Aplikace ve farmaceutické analýze
Aplikace sloupcové chromatografie HPLC při analýze léčiva
Jako důležitá technologie separační analýzy vykázala vysoce výkonná kapalinová chromatografie (HPLC) velký potenciál a hodnotu aplikací v oblasti farmaceutické analýzy od svého rychlého vývoje v 70. letech. Kombinace separačních principů klasické kapalinové chromatografie a plynové chromatografie se HPLC stala nezbytným nástrojem při analýze léčiva pro jeho účinnou separaci, rychlou analýzu, vynikající citlivost na detekci a širokou škálu aplikací.
Základní principy a vlastnosti
Využívá interakci pevných a mobilních fází k postupnému oddělování různých složek směsi. Stacionární fáze může být pevná nebo kapalina připojená k pevné látce, zatímco mobilní fáze je kapalina nebo plyn. V HPLC je rozpouštědlo nuceno sloupcem při vysokých tlacích až stovkách atmosféry, což výrazně zlepšuje účinnost separace. Podle různých separačních mechanismů lze HPLC rozdělit do normální fáze HPLC, HPLC reverzní fáze HPLC a vylučování objemu HPLC. Každý typ má svůj specifický rozsah aplikací a mechanismus separace, jako je HPLC normální fáze, aby se oddělovali analyty založené na polaritě, a HPLC reverzní fáze pro oddělení pomocí hydrofobních interakcí.
Charakteristiky chromatografie sloupce HPLC se odrážejí hlavně v následujících aspektech:
Vysoká separační účinnost: HPLC umožňuje efektivní separaci komplexních směsí díky vysokotlaké infuzní čerpadle a vysoce výkonným sloupcům.
Vysoká citlivost: Moderní detektory, jako jsou detektory absorpce ultrafialu, detektory fluorescence, detektory hmotnostní spektrometrie atd., Způsobují, že HPLC má extrémně vysokou citlivost na detekci.
Široký rozsah aplikací: HPLC není omezena volatilitou a tepelnou stabilitou vzorku a může analyzovat tepelné nestabilní fyziologické účinné látky s vysokým bodem varu a není snadné se odpařit.
Vysoký stupeň automatizace: Většina moderních nástrojů HPLC je vybavena automatickým vzorkovačem a zpracovatelem dat, což může realizovat automatizaci analýzy a rychlého zpracování dat.
 |
 |
 |
 |
Specifická aplikace v analýze léčiva
HPLC lze použít pro analýzu složení léčiva k určení aktivních složek a škodlivých nečistot drog. Například prostřednictvím analýzy flavonoidů, alkaloidů a dalších aktivních složek v čínských léčivých materiálech lze určit typy a obsah účinných látek, aby se zajistila kvalita a účinnost léčiv. Kromě toho může být HPLC také použita pro analýzu složení léčiva ve formách dávkování západních farmaceutických farmaků, jako jsou injekce, tablety, kapsle atd., Aby se zajistilo, že složení léčiva u léčiva splňuje stanovené požadavky.
HPLC hraje důležitou roli při určování koncentrace léčiva. Přesným stanovením obsahu léčiva v léčivu lze zajistit bezpečnost a účinnost léčiva. Například při analýze antibiotik lze HPLC použít ke stanovení antibiotického obsahu léčiva k vyhodnocení antibakteriálního účinku léčiva. Kromě toho může být HPLC také použita ke stanovení koncentrace léčiv v organismech, jako je plazma, moč, tkáň a další biologické vzorky, aby se vyhodnotila účinnost a nežádoucí účinky léčiv.
HPLC také hraje důležitou roli při hodnocení kvality drog. Porovnáním analytických dat různých šarží léčiv je možné posoudit, zda je kvalita léčiv stabilní. Kromě toho lze HPLC také použít ke studiu účinnosti a farmakokinetických charakteristik nových léků, což poskytuje vědecký základ pro vývoj a marketing nových drog. Například ve stadiu nového vývoje léčiva může být absorpce, distribuce, metabolismus a vylučování nových léčiv u zvířat určena HPLC, aby bylo možné porozumět účinnosti a farmakokinetické charakteristice nových léčiv a poskytovat silnou podporu pro klinické studie a marketingové aplikace nových léků.
Chirální léčiva se vztahují na molekuly léčiva s chirálními centry a jejich enantiomery se mohou významně lišit in vivo, metabolismus a toxicitu. Proto je velmi důležité izolovat a určit enantiomery chirálních drog. Tato chromatografie hraje důležitou roli při analýze chirálních léčiv. Zavedením chirální stacionární fáze nebo chirální mobilní fázové aditivy mohou být chirální léčivo enantiomery efektivně odděleny a stanoveny. Například pro opticky aktivní aminokyselinová léčiva mohou být touto chromatografií odděleny a stanoveny pro vyhodnocení biologické aktivity a toxicity léčiva.
Přírodní léky pocházejí z široké škály zdrojů se složitými kompozicemi a mohou obsahovat řadu bioaktivních sloučenin. Sloupková chromatografie hraje důležitou roli v analýze přírodních léčiv. Optimalizací chromatografických podmínek a výběrem vhodné mobilní fáze lze realizovat efektivní separaci a stanovení aktivních složek v přírodních lécích. Například tato chromatografická metoda byla použita k oddělení a stanovení aktivních složek čínské bylinné medicíny, jako jsou flavonoidy a saponiny, k porozumění jejich typům a obsahu a k zajištění silné podpory kontroly kvality, vývoje a využití čínské bylinné medicíny.
Výhody a výzvy sloupcové chromatografie HPLC při analýze léčiva
Chromatografická metoda má výhody vysoké účinnosti separace, vysoké citlivosti, širokého rozsahu aplikací a vysokou míru automatizace v analýze léčiva. V praktické aplikaci však čelí také některým výzvám. Například předběžné ošetření vzorku je velmi náročné na zajištění čistoty a stability vzorku; Vysoké analytické náklady, včetně získávání nástrojů, údržby, chromatografické a mobilní fáze; Kromě toho pro některé komponenty se silnou polaritou nebo velkou molekulovou hmotností nemusí být HPLC schopna zcela oddělit nebo detekovat špatně. V praktických aplikacích by proto měla být nejvhodnější metoda analýzy vybrána podle požadavků na kvalitu specifických léčiv a skutečné situace.
Budoucí výhled
S pokrokem vědy a technologie a vývojem vysoce výkonné technologie kapaliny chromatografie bude její aplikace v analýze léčiv širší. Na jedné straně vývoj nových stacionárních fázových materiálů výrazně rozšíří rozsah aplikací vysoce výkonné kapalinové chromatografie a zlepší účinnost separace a selektivitu. Na druhé straně budou nástroje HPLC inteligentnější a automatičtější, monitorovat stav sloupce v reálném čase prostřednictvím integrovaných senzorů, umožňující prediktivní údržbu, snížení prostojů a optimalizaci experimentálních procesů. Kromě toho může systém v kombinaci s technologií Big Data Analysis automaticky upravit provozní parametry tak, aby odpovídaly nejlepším separačním podmínkám různých vzorků, což zlepšilo experimentální účinnost a spolehlivost výsledků. Tyto pokroky budou poskytovat účinnější, přesnější a spolehlivější analytické nástroje pro analýzu léčiv, povede k rozvoji objevování léčiv a kontrole kvality.
Stručně řečeno, tento druh chromatografie hraje důležitou roli při analýze léčiv a má široké vyhlídky na aplikace. Neustále optimalizací chromatografických podmínek, výběrem vhodných mobilních a stacionárních fází, zavedením nových detekčních technologií a zařízení, dále zlepšením jeho přesnosti a spolehlivosti v analýze léčiv a poskytování silnější podpory pro vývoj léčiv, kontrolu kvality a klinické užívání drog.
Zásluhy a nedostatky
Výhoda
Efektivní oddělení
HPLC sloupcová chromatografie používá vysokotlaké infuzní čerpadlo a vysoce účinnou stacionární fázi, což činí účinnost sloupce mnohem vyšší než klasická kapalná chromatografie a může realizovat účinné separaci komplexních směsí.
Vysoká citlivost
Vybaveno detektory s vysokou citlivostí, jako jsou detektory ultrafialu, detektory fluorescence atd., Může detekovat nízké koncentrace vzorků, což je zvláště důležité pro analýzu stopování.
Široce používaný
Není to omezeno těkavostí a tepelnou stabilitou vzorku a může analyzovat organickou hmotu s vysokým bodem varu, špatnou tepelnou stabilitou a velkou relativní molekulární hmotou a má širokou škálu aplikací.
Dobrý výběr
Existuje mnoho druhů mobilní fáze a selektivitu separace lze zlepšit změnou typu a složení mobilní fáze tak, aby splňovaly analytické požadavky různých vzorků.
Vysoký stupeň automatizace
Většina moderních nástrojů HPLC je vybavena automatickým vzorkovačem a datovým procesorem, což může realizovat automatizaci analýzy a zlepšit účinnost analýzy.
Obnova vzorku je snadná
Vzorek není po průchodu sloupcem zničen a může být shromážděna nebo připravena jedna komponenta, což je vhodné pro následující experimenty nebo aplikace.
Nedostatek
Cena a denní náklady na údržbu kapalinových chromatografů jsou vysoké, včetně výměny sloupců, spotřeby mobilní fáze a pravidelné kalibrace nástroje.
Ačkoli rychlejší než klasická kapalinová chromatografie, časy analýzy HPLC jsou ve srovnání s plynovou chromatografií stále relativně dlouhé, zejména pro separaci a analýzu komplexních vzorků.
Přestože jsou nástroje HPLC vysoce automatizované, provoz a údržba nástrojů stále vyžaduje určitou úroveň odborných znalostí a zkušeností. Kromě toho může být předběžné zpracování vzorků komplikované.
Vzhledem k nevratné adsorpci některých sloučenin ve stacionární fázi nemusí být tyto sloučeniny účinně detekovány, což ovlivňuje přesnost analýzy.
LC separace je často silně ovlivněna teplotou sloupce a je třeba udržovat konzistentní teplotní podmínky, aby se dosáhlo opakovatelných výsledků, což zvyšuje složitost a náklady na experiment.
Opatření při určování obsahu léku
 |
 |
 |
Tato metoda má mnoho preventivních opatření pro stanovení obsahu léčiva, což je velmi důležité pro zajištění přesnosti a spolehlivosti výsledků stanovení. Zde je několik klíčových úvah:
Rozdíl ve sloupci ovlivní retenční chování léčiva, i když délka sloupce, vnitřní průměr, velikost částic stejného sloupce, v důsledku různých vlastností plniva, doba retenčního a píku léčiva se může výrazně lišit. Proto by měl být vybrán příslušný sloupec podle vlastností léčiva a separačních potřeb.
Sloupec by měl být pravidelně udržován, aby se zabránilo kontaminaci a zablokování, aby se zajistilo jeho dobrý separační výkon.
PH pufrovací soli mobilní fáze má významný vliv na retenční chování léků a dokonce může změnit pořadí vrcholu některých léků. Při optimalizaci mobilní fáze by proto měla být věnována zvláštní pozornost hodnotě pH pufrové soli.
Složení mobilní fáze také ovlivňuje separační účinek léčiva. Například při stanovení multivitaminových přípravků ovlivní změny relativního poměru hexanesulfonátu sodíku a heptanu sulfonátu v mobilní fázi v mobilní fázi. Proto by mělo být vybráno vhodné složení mobilní fáze podle povahy léčiva a analytických potřeb.
Proces manipulace s vzorkem by měl zajistit reprezentativnost a stabilitu vzorku, aby se zabránilo degradaci nebo kontaminaci vzorku během zpracování.
Při vážení vzorku by měla být aditivní metoda použita k vážení na místě najednou, aby se zajistila přesnost vážení. Současně by měla být operace vážení standardizována, aby se zabránilo úniku.
Kvalita referenční látky má přímý vliv na výsledek stanovení obsahu. Proto by měla být vybrána kvalita spolehlivého a přesného obsahu.
Kontrolní produkty by měly být uloženy podle potřeby, aby se zabránilo degradaci nebo kontaminaci. Pokud je ovládací produkt udržován v chladničce, měl by být před vážením zahřátý v sušicí peci.
Vhodný typ detektoru by měl být vybrán podle povahy léčiva a analytických potřeb, jako je detektor ultrafialu, detektor fluorescence atd.
Detektor by měl být pravidelně kalibrován, aby se zajistila přesnost výsledků měření.
Přiměřená statistická analýza údajů o měření, aby byla zajištěna spolehlivost a opakovatelnost výsledků. Například relativní standardní odchylka (RSD) plochy píku lze vypočítat pro vyhodnocení přesnosti výsledků měření.
Při výpočtu obsahu by měly být použity spolehlivé metody, jako jsou externí nebo vnitřní standardy, a měla by být zajištěna linearita standardní křivky.
Při stanovení nové metody stanovení obsahu by mělo být provedeno metodologické ověření, včetně specifičnosti, linearity, dosahu, přesnosti, přesnosti, trvanlivosti atd.
Metodické ověření je důležitým prostředkem k zajištění toho, aby metoda měření byla vědecká, přiměřená a spolehlivá.
Zajistěte, aby nástroj zůstal stabilní během procesu analýzy, zejména při provádění analýzy s více kolíky, věnujte pozornost pozorování, zda je hodnota odezvy a tvar píku nástroje stabilní.
Pokud během procesu analýzy dojde k abnormálnímu údajům, mělo by být pečlivě zkontrolováno a vyloučeno a v případě potřeby znovu analyzuje.
Populární Tagy: HPLC sloupcová chromatografie, Čína HPLC sloupcová chromatografie výrobci, dodavatelé, továrna
Odeslat dotaz
